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半夏的組織培養研究(附配方)

半夏為天南星科半夏屬多年生草本植物,是一種傳統的中藥材,其塊莖入藥。半夏的傳統藥理作用為燥熱化痰,消痞散結。本文從不同方面概述了近年來(lái)半夏組織培養方面的研究進(jìn)展,以期為半夏的生產(chǎn)和研究等方面提供參考。

基本培養基的選擇

培養基對半夏的組織培養有明顯的影響。蘇新采用MS、改良的White、H、N6 四種培養基進(jìn)行半夏愈傷組織的誘導。結果表明, 很好的是MS 培養基, 其次為改良的White 和H 培養基, 很低的是N6培養基。多數學(xué)者選用MS 培養基,但也有人使用B5 和White 型培養基。


外植體的選擇

在半夏組織培養中,外植體的選擇是關(guān)鍵的因素,外植體本身所具有的特性因子很大程度上決定著(zhù)其培養結果的不同。任家惠等在國內 很早報道了利用試管苗的葉片、葉柄誘導再生植株,認為葉片比葉柄的分化能力強。李光勝等利用半夏珠芽、塊莖、葉柄、葉片等作為外植體進(jìn)行組織培養,均得到了再生小植株。朱寶成等取掌葉半夏成熟種子,接種在誘導培養基中得到了再生植株。萬(wàn)美亮等報道葉柄誘導效果 很好,葉片次之,塊莖、珠芽較差。另外,用半夏原生質(zhì)體也可再生出植株。


植物生長(cháng)調節物質(zhì)

植物生長(cháng)調節物質(zhì)對植物細胞分裂、愈傷組織的誘導、再生植株的形成和次生代謝產(chǎn)物的合成等都起重要作用。在半夏組織培養過(guò)程中單一使用生長(cháng)素和細胞分裂素效果都不好,需二者適當的搭配使用。羅光明等報道生長(cháng)素與細胞分裂素濃度配比恰當與否是決定組培成功的一個(gè)關(guān)鍵因素。唐瓊蓮研究表明,2,4-D 和KT 有利于增加半夏鮮重和再生植株數目。羅成科等研究表明,相同激素,不同濃度配比對愈傷組織誘導有明顯的影響,MS+3.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA 誘導的愈傷為疏松愈傷組織。范美華等研究結果表明,MS+1.5mg/L KT+2.0mg/L 2,4-D 對半夏愈傷組織的誘導效果 很好。MS+0.2mg/L6-BA+0.5mg/L NAA 得到的愈傷組織較適合于器官的分化,MS+0.5mg/L6-BA+1.0 mg/L2,4-D 增殖培養的愈傷組織較適合于做細胞懸浮培養的材料。


再生器官發(fā)生的途徑

蘇新在研究半夏的再生時(shí)指出,再生的方式有兩種:一種是在愈傷組織上直接長(cháng)出苗;另一種是愈傷組織先分化成小塊莖,再從小塊莖上長(cháng)出苗。何奕昆等對半夏植株的再生途徑進(jìn)行形態(tài)解剖學(xué)分析,發(fā)現無(wú)論是從愈傷組織還是從葉柄上直接形成小植株均是通過(guò)小塊莖分化途徑完成的。吳伯驥等報道了兩條從半夏原生質(zhì)體再生植株的途徑:一是當愈傷組織分化時(shí),組織塊內部發(fā)生組織分化,先形成芽原基,再從愈傷組織表面分化出小芽,同時(shí)生成不定根;二是胚狀體發(fā)生途徑,即先從愈傷組織上分化出綠色小芽,然后形成球形胚狀體、心形胚狀體、魚(yú)雷形胚狀體、子葉形胚狀體, 很后誘導生根,繼而形成完整再生小植株。


人工種子

1978年 提出制作半夏人工種子的設想。半夏組織培養技術(shù)的日益成熟推動(dòng)了半夏人工種子制作的研究。何奕昆等用4%海藻酸鈉包埋直徑為2~3 mm的半夏塊莖,制成人工種子,在無(wú)菌培養基上的萌發(fā)率可達70%。張蘇鋒利用半夏珠芽制造的人工種子,在有菌條件下成苗率可達98.4%。但是用海藻酸鈉作為包埋材料保水性差,營(yíng)養物質(zhì)易滲漏,也極易染菌。薛建平等以3%海藻酸鈉和2%殼聚糖為種皮基質(zhì),添加GA3、多菌靈、苯甲酸鈉等制成復合型人工種皮,可獲95%的萌發(fā)率和90%的成苗率。目前,復合型包埋基質(zhì)是人工種皮材料的發(fā)展發(fā)向。吳愛(ài)民等將半夏的胚性愈傷組織附加在2,4-D 1.0mg/L,6-BA 0.5mg/L, 水解酪蛋白300mg/L 的MS 液體培養基中振蕩培養,獲得了大量體細胞胚,為人工種子的制作奠定了很好的基礎。


結語(yǔ)和展望

植物組織培養作為一項重要的生物技術(shù)存在無(wú)限的潛力和市場(chǎng)開(kāi)發(fā)價(jià)值。半夏的組織培養也還有不少問(wèn)題需要更進(jìn)一步探討研究。


 6.1 半夏組織培養條件的完善

對于半夏 很佳外植體的選擇,不同的學(xué)者研究的結果有所差異,甚至差異很大,產(chǎn)生的原因可能跟不同學(xué)者研究的半夏品種、所選培養基、添加的生長(cháng)調節物質(zhì)以及當時(shí)培養的外界條件等不同可能有關(guān)。植物的生長(cháng)調節物質(zhì)特別是生長(cháng)素類(lèi)和細胞分裂素類(lèi)已證實(shí)對半夏組織培養有至關(guān)重要的作用。但對于愈傷組織的誘導、增殖、器官的分化等 很適配比的報道,不同的學(xué)者研究的結果也不相一致。所以我們在以后的半夏組培研究中要把品種、培養基、激素、外界條件、實(shí)驗目的等因素都考慮進(jìn)來(lái),這樣才能更有利于對半夏的組織培養研究。


 6.2 建立和完善半夏的快速繁殖體系

利用半夏的組織培養進(jìn)行快速繁殖,可以一次性獲得再生苗。但要想滿(mǎn)足市場(chǎng)需求,必須建立半夏的無(wú)性系快速繁殖體系。目前這方面的研究雖有報道,但在愈傷組織繼代增殖培養過(guò)程中,會(huì )造成一些遺傳變異,改變試管苗的品質(zhì)。因此要不斷的完善和優(yōu)化相關(guān)技術(shù)條件。


 6.3 半夏人工種子的研發(fā)

  半夏人工種子的研制成功給半夏的快速繁殖與育種開(kāi)辟了一個(gè)新的領(lǐng)域。目前半夏人工種子的研究也取得了一定的成果,但用小塊莖作為人工種子的制作材料對于人工種子的規模生產(chǎn)十分有限,因而應考慮對半夏進(jìn)行細胞懸浮培養,以獲得大量胚狀體。進(jìn)而使半夏人工種子能達到工業(yè)化生產(chǎn)的要求。另外用海藻酸鈉作為包埋系統保水性差,營(yíng)養物質(zhì)易滲漏,也極易染菌,因此難以實(shí)際應用,故應選擇更適合的材料作為人工種子的種皮,目前,復合型包埋基質(zhì)是人工種皮材料的發(fā)展發(fā)向。


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