摘要：以金鐵鎖帶葉腋的嫩莖為外植體，開(kāi)展了基本培養基、腋芽誘導和增殖培養較優(yōu)培養條件的篩選，并對所獲得的生根苗進(jìn)行了移栽練苗試驗。結果表明：MS培養基適合作為金鐵鎖離體培養的基本培養基；金鐵鎖腋芽誘導培養的適宜培養基為MS+3.0mg/L 6-BA+0.01mg/LTDZ+0.20mg/L NAA，平均誘導芽數為4.15；在培養基1/2MS + 0.30mg/L IBA+0.10mg/L NAA+0.3g/L活性炭中進(jìn)行生根培養，生根率可達89.6％；在腐殖土∶紅土∶珍珠巖＝１∶１∶１的基質(zhì)中練苗，金鐵鎖組培苗的成活率可達90.5％。

　　金鐵鎖屬石竹科金鐵鎖屬植物，是我國傳統的藥用植物，又名獨定子、小霸王、金絲矮陀陀、象牙七、對葉七、土人參等，主要分布在貴州、四川、云南等地，作為傳統中藥材，首載于明代本草學(xué)家蘭茂著(zhù)的《滇南本草》中，謂其：“味辛辣，性大溫，有小毒，吃之令人多吐，專(zhuān)治面寒疼，胃氣心氣痛，攻瘡癰排膿。金鐵鎖以根入藥，具有活血化瘀、消炎、止血、止痛化膿等作用，傳統中醫適用于胃痛、跌打扭傷以及風(fēng)濕類(lèi)風(fēng)濕等癥，具有較好的鎮痛和抗炎作用。我國對中藥材的利用和研究已有3000年的歷史，傳統的中藥采集一般以野外挖采為主，野生資源隨著(zhù)近幾年中藥用量的加大而變得緊張。中藥材的缺乏導致價(jià)格上漲，同時(shí)加劇了這種植物資源的開(kāi)采力度，導致藥用植物資源的匱乏。近年來(lái)，藥用植物金鐵鎖的需求量日益增加，其自然繁殖力低，致使資源無(wú)序利用，自然蘊藏量下降，從而出現了野生資源缺乏的問(wèn)題。因此通過(guò)植物組織培養技術(shù)快速繁殖金鐵鎖種苗，對解決金鐵鎖資源緊缺問(wèn)題有著(zhù)重要意義。

１材料與方法

１．１試驗材料

　　供試金鐵鎖采自云南省麗江市玉龍縣，挖取長(cháng)勢好、健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的植株帶回，盆栽于實(shí)驗室內，待其長(cháng)出嫩枝后，備用。

１．２試驗方法

?。保玻?/span>基本培養基的篩選

取金鐵鎖帶葉腋的幼嫩莖段用水沖洗干凈，７５％酒精消毒30s，0.1％升汞消毒10min， 很后用無(wú)菌水沖洗3-5次，作為外植體。采用單因素試驗，培養基選KC、N6、MS、1/2MS、B5，上述基本培養基中均附加NAA1.00mg/L，30.0g/L蔗糖，5.0g/L瓊脂，pH5.7。接種時(shí)將莖段平鋪于基本培養基上培養。每種培養基接種５瓶，每瓶接種４枚，30d后統計平均增殖系數及幼苗的生長(cháng)情況， 很終篩選出適宜金鐵鎖的離體培養的基本培養基。

?。保玻?/span>腋芽誘導

　　以１．２．１中篩選的培養基為基本培養基（下同），設計不同配比的外源激素組合，并設空白對照(CK)，共計10個(gè)處理，將外植體接種于培養基中，每處理接種５瓶，每瓶接種４枚，30d后統計平均誘導腋芽數、平均苗高及幼苗的生長(cháng)情況， 很終篩選出適宜的金鐵鎖腋芽誘導培養的較優(yōu)培養條件。腋芽誘導的不同外源激素組合方案如表１所示。

?。保玻?/span>增殖培養

　　待誘導出的生長(cháng)健壯的腋芽長(cháng)至4-125px，將其截為１-２ｃｍ帶有葉腋的莖段，平鋪于增殖培養基上進(jìn)行增殖培養。增殖培養時(shí)，在基本培養基中添加不同配比的外源激素組合并設空白對照(CK)，共計１０個(gè)處理，每處理接種５瓶，每瓶接種４枚，３０ｄ后統計平均增殖系數、平均苗高及幼苗的生長(cháng)情況， 很終篩選出適宜的金鐵鎖莖段增殖培養的較優(yōu)條件。增殖培養時(shí)不同外源激素組合方案如表２所示。

?。保玻?/span>生根培養

選取增殖培養中健壯的無(wú)菌苗，切取長(cháng)約２ｃｍ 的頂芽接入1/2MS+0.3mg/LIBA+0.10mg/L NAA+0.3g/L活性炭并附加30.0g/L蔗糖和5.0g/L瓊脂的培養基(pH5.7)中。觀(guān)察并統計植株生長(cháng)和生根情況。

?。保玻?/span>練苗

將生長(cháng)健壯的金鐵鎖生根苗從培養室中移至溫室大棚，瓶?jì)染毭?d后，移栽至腐殖土∶黃土∶珍珠巖＝1：1：1的基質(zhì)中進(jìn)行練苗，并統計移栽成活率及生長(cháng)情況。培養條件為溫度２０℃，光照強度1200lx，光照周期12h/d。

２結果與分析

　?。玻?/span>基本培養基對金鐵鎖生長(cháng)情況的影響

　　金鐵鎖幼嫩帶葉腋的莖段經(jīng)消毒后，接種于不同的基本培養基中。由表３可以看出，經(jīng)30d的培養，增殖倍數可達0.8-1.7倍，MS培養基不定芽增殖系數 很高為1.7，KC培養基不定芽增殖系數 很低為0.8，說(shuō)明不同類(lèi)型的基本培養基對金鐵鎖莖段培養有明顯影響。方差分析表明，在MS、B5和1/2MS培養基中，金鐵鎖莖段的平均增殖系數之間無(wú)顯著(zhù)差異，說(shuō)明在這３種基本培養基中，均可獲得較好的培養效果。但是，MS培養基中生長(cháng)的芽苗長(cháng)勢粗壯、濃綠，生長(cháng)效果明顯優(yōu)于B5和1/2MS培養基，因此認為，MS培養基適合作為金鐵鎖莖段培養的基本培養基。

２．２誘導培養

　　金鐵鎖帶葉腋的莖段在不同的分化培養條件下，其腋芽的誘導效果不同。由表4可知，對照組CK平均分化芽數和苗高 很低，說(shuō)明外源激素的加入是金鐵鎖培養的必要條件。處理M4、M6及M8中，金鐵鎖的平均分化芽數差異不顯著(zhù)，說(shuō)明在這３種處理下，均可獲得較為理想的誘導效果。平均苗高方面，處理Ｍ５中，其叢生芽平均苗高為除CK以外處理中 很低的，為47.5px；而M4、M6及M8處理的平均苗高較高且無(wú)顯著(zhù)差異。但從芽的生長(cháng)情況來(lái)看，以M6號處理中苗的生長(cháng) 很為濃綠粗壯，且無(wú)玻璃化現象。因此，金鐵鎖腋芽誘導培養的 很佳培養方案為M6號處理，即：MS＋3.0mg/L6-ba＋0.01mg/LTDZ+0.20mg/LNAA（圖１）。

２．３增殖培養

　　在不同的增殖培養條件下，金鐵鎖莖段的增殖效果不同。從表５可以看出，沒(méi)有添加激素的處理CK增殖系數 很低為1.33。在添加了外源激素的處理中，A2處理的增殖系數和苗高均為 很高（分別為5.33和100px），且與其它處理均有顯著(zhù)差異。且在該處理中增殖苗長(cháng)勢粗壯、色濃綠，生長(cháng)效果明顯優(yōu)于其它處理。因此，金鐵鎖帶葉腋莖段的 很佳增殖培養基為Ａ２號處理組合（MS＋0.1mg/L6-ba＋0.05mg/LTDZ＋0.05mg/L NAA）（圖２）。

２．４生根培養

　　試驗選取增殖培養中健壯的無(wú)菌苗為材料，切取長(cháng)約２ｃｍ的頂芽接入1/2MS＋0.3mg/LIBA＋0.10mg/L NAA＋0.3g/L活性炭的生根培養基中，植株生長(cháng)健壯，生根條數為５．３條，生根率達89.6%（圖３）。

２．５練苗移栽

　　將生根良好，生長(cháng)健壯的金鐵鎖組培瓶苗從組織培養室移至普通實(shí)驗室或溫室大棚，瓶?jì)染毭?d，然后將苗從組培瓶中移栽至黃土∶腐殖土∶珍珠巖＝1：1：1的基質(zhì)中，植株生長(cháng)健壯，成活率達到90.5%（圖４）。

３討論與結論

　　試驗結果表明，MS培養基適合作為金鐵鎖生長(cháng)的基本培養基。這與楊耀文等和歐陽(yáng)志勤的研究結果相一致，說(shuō)明MS基本培養基組分比較適合金鐵鎖離體培養。而試驗中發(fā)現，在MS和B5培養基中，金鐵鎖莖段的平均增殖系數之間無(wú)顯著(zhù)差異。但是，MS培養基中生長(cháng)的芽苗長(cháng)勢粗壯、濃綠，生長(cháng)效果明顯優(yōu)于B5培養基中的芽苗。而李景濱等以B5為基本培養基，分別對金鐵鎖莖段進(jìn)行無(wú)菌苗誘導、增殖和生根培養，均取得了較理想的效果，這與該研究結果有差異，可能與培養時(shí)的條件、培養周期及金鐵鎖取材的基因型不同有關(guān)。

　　研究表明，金鐵鎖腋芽誘導培養的適宜培養基為MS＋3.0mg/L6-ba＋0.01mg/LTDZ+0.20mg/L NAA，平均分化芽數為4.15，誘導不定芽顏色濃綠，長(cháng)勢較粗壯。李景濱等在B5培養基中附加了0.5mg/L 6-ba和0.5mg/L IAA，誘導金鐵鎖新生苗效果 很好，所得芽苗生長(cháng)快，葉色濃綠?？梢?jiàn)，不同的基本培養基中，附加不同激素，均可獲得較理想的誘導效果。而楊耀文等和歐陽(yáng)志勤等在以MS為基本培養誘導分化時(shí)，均通過(guò)了愈傷誘導途徑。但是，從腋芽長(cháng)出的植株生長(cháng)健壯，具備優(yōu)良的遺傳性，可作為進(jìn)一步增殖和生根的材料。因此，為確保優(yōu)良試驗材料的來(lái)源，應盡量減少植株從愈傷中增殖，多從腋芽中增殖。